成都细胞储存机构告诉你收到冻存细胞后如何处理?

　　成都细胞储存机构告诉你收到冻存细胞后如何处理?

　　1、收到细胞时，请检查泡沫箱内干冰是否剩余、细胞冻存管是否有解冻情况，若出现细胞解冻情况，请拍照，并及时与技术支持联系(所拍照片将作为售后服务依据);若细胞冻存管正常，细胞株请尽速开始培养或立即冻存保存(置于-80℃冰箱，隔夜放置后，移至液氮罐中保存)，需要时，复苏培养即可。

　　2、准备好37℃水浴锅，并准备好细胞完全培养基(温育至37℃);

　　3、在15ml离心管中加入9ml细胞完全培养基(温育至37℃);

　　4、将装有冻存细胞的冻存管从液氮罐中取出，立即放入37℃水浴中;

　　5、在37℃水浴中快速晃动细胞冻存管，使得冻存管中内容物尽快融化;仔细观察，待冻存管中内容物完全融化后取出;注意：①尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险;②要快速完成细胞复苏过程(尽量控制在1分钟内)，融化过程时间过长，会造成复苏后细胞活性较差。

　　6、用70%—75%酒精消毒冻存管外壁，在超净台中打开冻存管，用吸管/移液器将细胞冻存悬液移入装有9ml细胞完全培养基的15ml离心管中(在这一过程请尽可能避免产生气泡)。

　　7、为了减少细胞损失，往细胞冻存管中加入1ml完全培养基，稍微吹打，用吸管/移液器将这1ml的细胞悬液吸入离心管中，再用吸管/移液器将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。

　　8、以250×g的离心力(约1200-1350rpm)将细胞悬液离心3-5分钟。

　　9、离心后，检查上清液是否清澈，有无完整的细胞沉淀;在超净台内，尽量去除上清液，向细胞沉淀物加入1-2ml的完全培养基(温育至37℃)，轻轻吹打混匀。

　　10、将细胞全部接种至1个T25细胞培养瓶或60mm无菌塑料培养皿中，加入6-8ml细胞完全培养基;轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。

　　11、置于37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温培养箱中静置培养。

　　12、之后，参照细胞说明书换液频率给细胞换新鲜的完全培养基(温育至37℃)，直到细胞达80%的汇合度;当细胞达80%-90%的汇合度，可参照细胞说明书传代比例进行消化、传代。

成都细胞储存

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